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传代细胞操作步骤:
1)吸除培养瓶内旧培养液。
2)向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。
3)置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,Bv-2细胞, 小鼠小胶质瘤细胞间隙增大后,立即终止消化。
4)吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液小鼠ELISA试剂盒后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。
5)用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
6)计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。
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