酶联免疫吸附实验（ELASA）具体操作步骤

ELASA是一种用酶标记抗原或抗体，在固相反应板上进行抗原抗体反应的方法。常用于检测体液中的微量抗原和抗体，具有灵敏度高、特异性强、操作简单、容易判断等优点。其检测方法、注意事项、结果分析等详见检测试剂的说明书。本实验以双抗体夹心法为例检测乙型肝炎病毒表面抗原介绍如下：

实验目的

要求了解试验原理，试验方法及结果分析。

实验材料

1．标本：待检人血清

2．试剂：酶标抗体（抗HBs）、HBsAg阳性对照血清、阴性对照、洗涤液、显色剂A、B，终止液

3．器材：已被抗体包被的微量反应板（48孔）、微量移液管、酶标仪等。

实验内容与方法

1．在微量反应板每孔加入待检标本50μl，设阳性、阴性对照各2孔，每孔加入阳性（或阴性）对照各1滴，并设空白对照1孔。

2．每孔加入酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。

3．弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

4．每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37℃孵育15分钟。

5．每孔加终止液1滴，充分混匀。

6．用酶标仪读数，取波长450nm，先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

实验结果与评价

样品OD值≥2.1阴性对照平均OD值，判断为阳性，否则为阴性。阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。