ELISA试剂盒动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数目，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足足数目的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，为雄性，此外还需十分留意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。放血过程中要严格按无菌要求进行。在无菌前提，吸出血清，分装（0.05～0.2ml），贮于-40℃以下冰箱，或冻干后贮存于4。取动脉或静脉放血时，将兔放入一个特造的木匣或笼内，耳露于箱（笼）外，也可由另一人抓住兔身。为避免损失抗原，亦可用一打针器装抗原液，另一打针器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者往返反复抽吸，约数十分钟后即能*乳化。交叉反应率一般是用竞争按捺曲线来判定的。若用兔，用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。
ELISA试剂盒兔是zui常用以产生抗体的动物，因此这里主要讨论兔血的收集。通常，特异性是以交叉反应率来表示的。颈动脉放血时，将兔仰卧，固定于兔台，剪去颈部的毛，切开皮肤，暴露颈动脉，插管，放血。以不同浓度的抗原和近似抗原物质分别做竞争按捺曲线，计算各自的结合率（B/T或B/B0），求出各安闲IC50时的浓度，按下列公式计算交叉反应率。二礼拜后，可在另一耳放血。此法可反复多次放血。
作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。在第2次加强免疫后2周，从耳缘静脉取2～3ml血，制备血清，检测抗体效价。羊等较大动物以颈静脉、动脉取血，鼠等小动物取血可参阅有关资料。剪去耳缘的毛，用少许二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管扩张、充血。用手轻拉耳尖，以单面剃须刀或尖的手术刀片，快速切开动脉或静脉，血液即流出，每次可收集30～40ml 。免疫前取等容积*或不*佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，平均后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继承研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内*不扩散为止。交叉反应率低，表示抗血清的特异性好，反之则特异性差。
收集的血液置于室温下1h左右，凝固后，置4℃下，过夜（切勿冰冻）析出血清，离心，4000rpm，10min。取兔血有两种方法，一是耳缘静脉或耳动脉放血，二是颈动脉入血，也可心脏采血。加强免疫时用不*佐剂，免疫时皮下打针百日咳疫苗0.5ml，加强免疫时不必打针百日咳疫苗。特异性好就是抗血清的识别能力强，当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。抗原剂量，剂量为300～500μg，加强免疫的剂量约为剂量为1/4左右。 C冰箱保留。检查合格后即以其中一打针器作打针用。佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使介入免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。如未达到预期效价，需再进行加强免疫，直到满足时为止。
常用的佐剂是福氏佐剂（Freund adjuvant），其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不*福氏佐剂，在每毫升不*佐剂加入1～20mg卡介苗就成为*佐剂。每2～3周加强免疫一次。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉打针。因为不同个体对统一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此经常在打针抗原的同时，加入能增强抗ELISA试剂盒原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保留备用。