其次要考虑的是R&D Systems的免疫测试方法测量的蛋白水平是用一种抗体捕获的、用第二种抗体测定的，这种测定是在ELISA试剂盒研发时与标准蛋白校正过的。

间接法

1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；

2.次日洗涤3次；

3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，ELISA试剂盒加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；

5.37℃孵育30-60分钟，洗涤；

6.’zui后一遍用DDW洗涤。

7.　加底物液显色：ELISA试剂盒于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

8.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。